مقایسه ی فراوانی واریانت Fok1 ژن ویتامین D رسپتور در کودکان مبتلا به عفونت مجاری ادراری فوقانی و کودکان سالم

عفونت ادراری یکی از شایع ترین عفونت های باکتریال اکتسابی در دوران کودکی می باشد که 10 % کودکان را درگیر می کند . (1) با توجه به این که بیشترین تعداد کودکان مبتلا به عفونت ادراری علامت دار در دهه اول عمر قرار دارند ، بنابراین این گروه بیشتر در معرض پیدایش اسکار کلیه و عوارض احتمالی بعدی نظیر مختل شدن رشد ، هایپرتنشن شریانی ، پروتئینوری و نهایتا نارسایی مزمن کلیه می باشند . (2) نتایج بررسی اسکن هسته ای کلیه در کودکان با UTI نشان می دهد که  عفونت ادراری پارانشیم کلیه را تحت تاثیر قرار می دهد و در 20 الی 40 % موارد باعث آسیب دائمی سلول های کلیه و ایجاد اسکار کلیه می شود (3) همچنین عفونت ادراری در نوزادان می واند به سرعت باعث پیلونفریت و سپسیس شود که تهدید کننده ی حیات است (4) 

شدت عفونت ادراری توسط عوامل مختلفی از جمله پاتوژن ایجاد کننده و واکنش ایمنی بدن میزبان تعیین می شود . ویتامین ها و ریز مغذی ها نقش بسیار مهمی در حمایت از سیستم دفاعی بدن انسان دارند و هموستاز نقش اساسی در پاسخ به عفونت ها دارد (5) شایع ترین پاتوژن دخیل در UTI کودکان در 90 درصد دختران و 80 درصد پسران مبتلا به UTI ، E.coli می باشد زیرا می تواند به سلول های اندوتلیوم مجاری ادراری متصل شود . (6) 

در خاورمیانه و آسیا فقر مواد غذایی از نظر ریزمغذی ها و ویتامین ها به خصوص ویتامین D در کودکان به دلیل رژیم غذایی نامناسب و عفونت های مکرر بسیار شایع است . کمبود ویتامین D شدید باعث ایجاد ریکتز در کودکان و استئومالاسی در بزرگسالان می شود لذا به نظر می رسد ویتامین D بیشتر جهت سلامت استخوانها اهمیت دارد (7) اما مطالعات نشان داده اند میان کمبود ویتامین D و عفونت هایی همچون توبرکلوز ، عفونت های تنفسی ، آنفولانزا ، سپسیس و عفونت ادراری ارتباط وجود دارد . (8) 

مکانیسم های متعددی ارتباط ویتامین D و عفونت ادراری را توجیه می کنند :

1. ویتامین D در ساخت و ترشح پپتید آنتی باکتریال Cathelicidin در سلول های اپی تیالی مثانه موثر است . (9)

2. ویتامین D از طریق افزایش تحرک نوتروفیل ها باعث تقویت سیستم ایمنی می گردد. 

3. بعضی مطالعات نشان داده اند که کمبود ویتامین D در روند و پیشرفت هایپرتروفی پروستات در آقایان موثر است . (10) 

4. ویتامین D با فعال کردن ماکروفاژها و افزایش فاگوسیتوز به عنوان تنظیم کننده ی سیستم ایمنی عمل می کند . (11)

ویتامین D جهت متابولیسم کلسیم ضروری است . نیاز به ویتامین D از طریق مواد غذایی یا تماس پوستی با آفتاب تامین می شود .(4) گیرنده های ویتامین  D ، گیرنده های هسته ای هستند که عملکرد بیولوژیکی این ویتامین را تنظیم می کنند . (12) ژن گیرنده ی ویتامین D در منطقه ی 12q13.1 ژنوم انسانی قرار دارد . (13) . 

تصور می شود بیش از 200 پلی مورفیسم ژن گیرنده ی ویتامین D وجود دارد که شایع ترین آنها Fok 1  ، BsmL ، Apa 1 ، Taq 1 می باشند . آلل های متفاوت گیرنده ی ویتامین D باعث عملکرد متفاوت ویتامین D می شوند که منجر به مقاومت یا حساسیت نسبت به عفونت های مختلف می شوند . (14)

در بررسی که توسط ANDIRAN و همکاران در ترکیه انجام شد فراوانی کمبود ویتامین D در کودکان حدود40 درصد تخمین زده شده است .(15) 

در مطالعه ی TEKIN و همکاران  بر روی 82 کودک با اولین اپیزود عفونت ادراری و 64 کودک در گروه کنترل ، میانگین سطح سرمی وستامین D فعال در کودکان مبتلا به عفونت ادراری به صورت چشمگیری نسبت به گروه کنترل پایین تر بود . همچنین سطح سرمی ویتامین D فعال در کودکان مبتلا به پیلونفریت حاد در مقایسه با کودکان مبتلا به عفونت ادراری تحتانی پایین تر بود . میانگین سطح ویتامین D در دختران پایین تر از پسر ها بود . بر اساس این مطالعه سطح سرمی ویتامین D کمتر از 20 نانوگرم در میلی لیتر با عفونت ادراری در کودکان مرتبط است و کمبود ویتامین D ، عامل خطر عفونت ادراری کودکان می باشد . (16)

در پژوهش جوادی نیا و همکاران در تهران بر روی 25 بیمار مبتلا به عفونت ادراری بستری شده در بخش کودکان و 40 بیمار در گروه کنترل شامل 72 % پسر و 28 % دختر با میانگین سنی دو سال و هفده ماه ، میزان ویتامین D و A در کودکان مبتلا به عفونت ادراری در مقایسه با گروه کنترل کمتر بود ولی اختلاف معناداری نداشت. بر اساس این پژوهش کبود ویتامین های D و A می تواند در استعداد ابتلا به عفونت ادراری نقش داشته باشد . (17)

در بررسی HACIHAMDIOĞLU و همکاران بر روی 36 کودک مبتلا به عفونت ادراری و 38 کودک در گروه کنترل ، ارتباط سطح سرمی فرم فعال ویتامین D و Cathecidin ادراری به عنوان یک پپتید آنتی باکتریال مهم در سیستم ادراری بررسی شد . میانگین سنی بیماران در این مطالعه حدود 6/3 -/+ 8/6 سال بود . بر اساس نتایج این پژوهش در کودکان مبتلا به کمبود ویتامین D ،  سطح cathecidin ادراری در سیر عفونت ادراری افزایش پیدا نمی کند . لذا کمبود ویتامین D از جهات مختلفی سیستم ایمنی را تحت تاثیر قرار می دهد و باعث عفونت می گردد . (18)

در مطالعه ی VAN DER STARRE و همکاران بر روی 46 کودک مبتلا به عفونت ادراری با Ecoli  و 45 بیمار گروه کنترل ، سطح سرمی ویتامین D و بیومارکر هایی همچون اینترلوکین 6 در بیماران بررسی شد . بیماران مبتلا به عفونت ادراری نسبت به گروه کنترل سطح سرمی ویتامین D پایین تری داشتند اما ارتباط معناداری بین آنها وجود نداشت . (19)

در پژوهشی که ASLAN و همکاران جهت بررسی پلی مورفیسم ژن گیرنده ی ویتامین D در سلول های مجاری ادراری در کودکان مبتلا به عفونت ادراری انجام شد ، پلی مورفیسم Bsm1 در دو گروه کودکان مبتلا به عفونت ادراری و گروه کنترل کودکان بدون سابقه عفونت ادراری ، مشابه بود . پلی مورفیسم ژن Apa 1  به صورت چشمگیری در گروه کنترل بالاتر بود لذا به عنوان فاکتور محافظتی در نظر گرفته می شود . بر اساس این مطالعه پلی مورفیسم ژن گیرنده ی ویتامین D در استعداد ابتلا به عفونت ادراری و ایجاد اسکار کلیوی مهم است . (12)

پلی مورفیسم های مختلف ژن گیرنده ویتامین D در کنسرهای مختلف نقش دارند . در مطالعه ی RaimondiS و همکاران پلی مورفیسم fok 1  در کنسر پوت و پستان به صورت چشم گیری بالاتر است . در نژاد سفیدپوست خطر کنسر پروستات در ناقلین ژن Bsm 1  با ژنوتیپ Bb نسبت به ژنوتیپ bb پایین تر است . (20)

همچنین در مطالعه ی دیگری ،  Khan MI و همکاران نشان دادند که ژن گیرنده ی ویتامین D با سرطان های پستان و کلیه مرتبط است . زیرا این ژن ها در ساخت پروتئین های موثر در تکثیر سلولی ، مرگ سلولی و تنظیم سیک سلولی نقش دارند . (21)

در پژوهش Nishijima S و همکاران ارتباط سنگ های مجاری ادراری و ژن های گیرنده ی ویتامین D را بررسی کردند . 83 بیمار با سنگ مجاری ادراری و 83 بیمار در گروه کنترل وارد مطالعه شدند . بررسی ژن های گیرنده ی ویتامین D در دو گروه نشان داد ک ژن Taq 1 در گروه بیماران با سنگ ادراری بالاتر است در حالی که ژن Apa 1 در دو گروه بیمار و کنترل متفاوت نبود . (22)

در پژوهش Mahyar A  و همکاران ، پلی مورفیسم ژن گیرنده ویتامین D در 60 کودک مبتلا به عفونت مجاری ادراری با 60 کودک سالم مقایسه شد . بر اساس نتایج این مطالعه از نظر پلی مورفیسم های ژن گیرنده ی ویتامین D تفاوت چشم گیری میان کودکان با اولین اپیزود عفونت مجاری ادراری و کودکان با اپیزودهای مکرر وجود نداشت . تفاوت چشم گیری میان عفونت مجاری ادراری تحتانی و پیلونفریت حاد در پلی مورفیسم های  Apal  و Bsml وجود دارد . ژنوتیپ های مختلف پلی مورفیسم Bsml در کودکان با عفونت مجاری ادراری تحتانی به صورت بارزی بالاتر است . (23)با توجه به این که عفونت ادراری فوقانی در اطفال می تواند باعث اسکار در کلیه ها و ایجاد عوارض دراز مدت فراوانی داشته باشد .و با توجه به پژوهش های انجام شده مبنی بر تاثیر پلی مورفیسم های ژن گیرنده ویتامین D در عفونت های قسمت های مختلف ما بر ان شدیم تا این پلی مورفیسم ها در کودکان مبتلا به عفونت ادراری بررسی کنیم

1-فراوانی پلی مورفیسم fok I ژن ویتامین D رسپتور در کودکان مبتلا به عفونت مجاری ادراری فوقانی و کودکان سالم متفاوت است.

تعیین و مقایسه فراوانی واریانتهای  Fok I ژن ویتامین D رسپتور در کودکان مبتلا به عفونت مجاری ادراری فوقانی و کودکان مراجعه کننده به کلینیک نفرولوژی

1-تعیین  و مقایسه فراوانی پلی مورفیسم fok I ژن ویتامین D رسپتور در کودکان مبتلا به عفونت مجاری ادراری فوقانی و کودکان سالم مراجعه کننده به کلینیک نفرولوژی

بیمارستان علی بن ابیطالب (ع) شهرستان زاهدان

عفونت مجاری ادراری فوقانی: به التهاب کلیه ها که به صورت کلینیکی با تب و درد فلانک و کشت ادراری مثبت (≤10⁶) متناسب با سن کودک تعریف می شود.

مورد-شاهدی

معیارهای ورود

1-کودکان بین سن های 2 ماه تا 15 سال که عفونت مجاری ادراری فوقانی تایید شده دارند بدون بیماری های مثانه نوروژنیک و بازگشت ادرار از مثانه به کلیه

2- کودکان سالم بدون سابقه عفونت ادراری فوقانی قبلی

معیار خروج:

کودکان دارای بیماری مثانه ای نوروژنیک و بازگشت ادرار از مثانه به کلیه و آنومالی های کلیوی بودند

100 نفر شاهد و 100 نفر مبتلا که با استفاده ار فرمول زیر محاسبه گردید.

در دسترس

فرم اطلاعاتی

شرکت کنندگان در مطالعه کودکان با سن 2ماه تا15سال مراجعه کننده به کلینیک نفرولوژی  در بیمارستان علی بن ابیطالب (ع)شهرستان زاهدان می باشند که به دو گروه به صورت نمونه و کنترل تقسیم می شوند که براساس مطالعات قبلی و بررسی های آماری حجم گروه نمونه 42 نفر و کنترل 42 نفر تعیین می شود.نمونه ها، کودکان هستند که به صورت کلینیکی عفونت ادرار فوقانی (به صورت تب،درد فلانک و کشت مثبت ادرار متناسب با سن وی تعیین می شود)آنها تعیین شده است و با اسکن DSMA تایید تشخیص میکنیم و گروه کنترل از افراد مراجعه کننده به کلینیک با همین سن و جنس  که برای چکاپ و بدون هیچ گونه مشکل ادراری بودند، انتخاب میکنیم  پس از کسب رضایت نامه اخلاقی،  تکمیل پرسشنامه و جمع آوری اطلاعات، از هر فرد شرکت کننده در مطالعه حداقل5  میلی لیتر خون محیطی گرفته شده و در لوله های حاوی EDTA در دمای 20- درجه سانتیگراد تا زمان استخراج DNAنگهداری میشود. استخراج  DNA  از لنفوسیتهای خون محیطی با استفاده از روش استانداردSalting out انجام می شود. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین واریانتهای  ژنی با روش PCR-RFLP طراحی میشوند. بعد از بهینه سازی شرایط PCR ، پلی مورفیسمهای مورد مطالعه با تکنیک های RFLP-PCR بررسی  و محصول PCR بر روی ژل آگارز 2% الکتروفورز میگردد.

بخش توصیفی نتایج از طریق جدول آمار های توصیفی ، میانگین ،انحراف معیار ،درصد فراوانی و جداول و نمودارها بیان می شود و برای تحلیل نتایج از آزمون کای دو استفاده میکنیم . سطح معناداری آزمون ها 0.05 تعریف می‌شود

ملاحظات اخلاقی ازراهنمای اخلاق پزوهش در گروه های اسیب پذیر  فصل دوم کودکان و نو.ادان کد  -4 11- 12-15-15 و 20-3

و ازراهنمای عمومی اخلاق در پزوهش های علوم پ.شکی دارای آزمودنی های انسانی فصل مقدمه کدهای 1-2-3-4-5 -9-11-12-13-16-22-23-24و -31 -27

و ازراهنمای اخلاقی پزوهش بر روی عضو و بافت های انسانی از   فصل راهنمای عمومی 1تا 12 رعایت میشود

و ازراهنمای اخلاق پزوهش با سلولهای بنیادی فصل ژنتیک کد های 5تا 15 رعایت میشود

در صورت کم بودن نمونه مورد نظر

مشکل در تهیه آنزیم و مواد وارداتی

Variant, Vitamin D receptor, urinary tract infection.

1. CRAIG, J. C. Urinary tract infection: new perspective on a common disease. Curr Opin Infect Dis, 2001, 14: 30-31.‏
2. RABASA, A. I.; GOFAMA, M. M. Urinary tract infection in febrile children in Maiduguri north eastern Nigeria. Nigerian journal of clinical practice, 2009, 12.2.‏
3. ‏ ELLIS, Danielle R.; SALT, David E. Plants, selenium and human health. Current opinion in plant biology, 2003, 6.3: 273-279.‏
4. KATIKANENI, Ranjitha, et al. Breastfeeding does not protect against urinary tract infection in the first 3 months of life, but vitamin D supplementation increases the risk by 76%. Clinical pediatrics, 2009, 48.7: 750-755.
5. JAHNUKAINEN, Timo; CHEN, Ming; CELSI, Gianni. Mechanisms of renal damage owing to infection. Pediatric nephrology, 2005, 20.8: 1043-1053.‏
6. SMELLIE, Jean M., et al. Long-term low-dose co-trimoxazole in prophylaxis of childhood urinary tract infection: clinical aspects. Br Med J, 1976, 2.6029: 203-206.
7. JORDE, Rolf, et al. Prevention of urinary tract infections with vitamin D supplementation 20,000 IU per week for five years. Results from an RCT including 511 subjects. Infectious Diseases, 2016, 48.11-12: 823-828.‏
8. KEARNS, Malcolm D., et al. Impact of vitamin D on infectious disease. The American journal of the medical sciences, 2015, 349.3: 245-262.
9. HERTTING, Olof, et al. Vitamin D induction of the human antimicrobial Peptide cathelicidin in the urinary bladder. PloS one, 2010, 5.12: e15580.‏
10. ADORINI, Luciano, et al. Vitamin D receptor agonists target static, dynamic, and inflammatory components of benign prostatic hyperplasia. Annals of the New York Academy of Sciences, 2010, 1193.1: 146-152.
11. LEWIS, S. J.; BAKER, I.; DAVEY SMITH, G. Meta-analysis of vitamin D receptor polymorphisms and pulmonary tuberculosis risk. The International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, 2005, 9.10: 1174-1177.
12. ASLAN, Sule, et al. Vitamin D receptor gene polymorphism in children with urinary tract infection. Pediatric nephrology, 2012, 27.3: 417-421.
13. ‏‏UITTERLINDEN, André G., et al. Genetics and biology of vitamin D receptor polymorphisms. Gene, 2004, 338.2: 143-156.‏
14. RUGGIERO, Marco, et al. Association between vitamin D receptor gene polymorphism and nephrolithiasis. Mineral and electrolyte metabolism, 1999, 25.3: 185-190.
15. ANDIRAN, Nesibe, et al. Vitamin D deficiency in children and adolescents. Journal of clinical research in pediatric endocrinology, 2012, 4.1: 25.
16. TEKIN, Mehmet, et al. The association between vitamin D levels and urinary tract infection in children. Hormone research in paediatrics, 2015, 83.3: 198-203.
17. جوادی نیا, et al. مقایسه سطح سرمی ویتامین A، D و روی در کودکان شش ماه تا پنج سال مبتلا به عفونت ادراری با گروه کنترل در دو بیمارستان دانشگاهی. مجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهران, 2013, 71.4: 244-249.
18. HACIHAMDIOĞLU, Duygu Övünç, et al. The association between serum 25-hydroxy vitamin D level and urine cathelicidin in children with a urinary tract infection. Journal of clinical research in pediatric endocrinology, 2016, 8.3: 325.‏
19. VAN DER STARRE, Willize E., et al. Urinary proteins, vitamin D and genetic polymorphisms as risk factors for febrile urinary tract infection and relation with bacteremia: a case control study. PloS one, 2015, 10.3: e0121302.‏
20. Raimondi S, Johansson H, Maisonneuve P, Gandini S. Review and meta-analysis on vitamin D receptor polymorphisms and cancer risk. Carcinogenesis. 2009 Apr 29;30(7):1170-80.
21. Khan MI, Bielecka ZF, Najm MZ, Bartnik E, Czarnecki JS, Czarnecka AM, Szczylik C. Vitamin D receptor gene polymorphisms in breast and renal cancer: current state and future approaches. International journal of oncology. 2014 Feb 1;44(2):349-63.
22. Nishijima S, Sugaya K, Naito A, Morozumi M, Hatano T, Ogawa Y. Association of vitamin D receptor gene polymorphism with urolithiasis. The Journal of urology. 2002 May;167(5):2188-91.
23. Mahyar A, Ayazi P, Afshar AS, Farivar TN, Sahmani M, Oveisi S, Shabani R, Esmaeili S. Vitamin D receptor gene (FokI, TaqI, BsmI, andApaI) polymorphisms in children with urinary tract infection. Pediatric research. 2018 Oct;84(4):527

ضمیمه می شود

مقایسه فراوانی واریانت fok1ویتامین D ذر کوذکان مبتلا به عفونت اذراری و کوذکان سالم

خون گیری دارد

موثر در درمان بیماران مبتلا به عفونت ادراری

عوارض جانبی ندارد

ندارد

از بودجه دانشگاه

خون گیری از افراد دیگر

کاملا محرماته از اسم و مشخصات افراد استفاده نمیشود

در صورت وجوذ هر گونه سوال و مشکل به سوالات باسخ داده میشود

در صورت عدم تمایل به انجام حق انصراف و نبذیرفتن دارد

اینجانب ....... رضایت کامل جهت انجام خون گیری دارم