بررسی پلی مورفیسم های rs3783553، rs3783550، rs3783550، rs16944، rs10490571 و VNTR در بیماران ترومباستنی گلانزمن و سالم

ترومباستنی گلانزمن(GT) شایع ترین اختلال ارثی پلاکتی با توارث اتوزومال مغلوب است که با اختلال در عملکرد پلاکت ها و تمایل به خونریزی مادام العمر به دلیل نقص های کمی و یا کیفی در اینتگرین αIIbβ3 (GPIIb-IIIa) غشاء پلاکت به ارث می رسد(1). این بیماران با یک سندرم خونریزی دهنده به دنیا می آیند که از نظر شدت و تعداد دفعات خونریزی متفاوت هستند که در مواردی تهدیدکننده زندگی است(2). این بیماری نادر با شیوع تقریبی 1:1 میلیون نفر در سراسر جهان توزیع دارد، ولی در مناطقی که در آن ازدواج فامیلی مرسوم است از جمله ایران شیوع بیشتری دارد. در ایران با احتمال شیوع حدود 1 در هر 200000 نفر، بالاترین شیوع در جهان را شامل می شود. این شیوع بالا قابل مقایسه با اختلالات انعقادی اتوزوم مغلوب در ایران است (3). در این بیماران شمارش پلاکتی و حجم پلاکت نرمال می باشد ولی زمان سیلان طولانی و اگریگاسیون پلاکتی معیوب می باشد. علائم خونریزی به طور معمول به سرعت پس از تولد آشکار می شود و اکثریت بیماران قبل از سن 5 سالگی تشخیص داده می شوند. پورپورا، خونریزی از بینی، خونریزی از لثه و منوراژی از مشخصه های تقریبا ثابت بیماری هستند.(4) .بیشتر بیماران دارای سابقه قابل توجهی از تزریق گلبول قرمز و تزریق پلاکت هستند به ویژه زنانی که اغلب از منوراژی شدید به خصوص در شروع قاعدگی رنج می برند افزایش ریسک خونریزی در دوران بارداری و زایمان را دارند(4). به عنوان یک قاعده، هیچ درمان خاصی برای اکثریت قریب به اتفاق اختلالات پلاکتی مادرزادی وجود ندارد. در خونریزی های متوسط و شدید و اکثر جراحی ها که اقدامات موضعی غیرموثر هستند، تزریق پلاکت مورد نیاز است. تزریق پلاکت به طور مکرر منجر به واکنش های آلرژیک و آلوایمونیزاسیون برعلیه آنتی ژن های لکوسیتی انسان (MHC-I) و گلیکوپروتئین αIIbβ3 می شود. در برخی مطالعات مشاهده شده تزریق یک واحد پلاکت برای القای پاسخ ایمنی کافی بوده و حتما لازم نیست به تعداد زیاد در معرض تزریق پلاکت قرار گرفته باشد. آلوآنتی بادی های تشکیل شده تجمع پلاکت های تزریق شده را مسدود و یا منجر به حذف سریع پلاکت های تزریق شده توسط مکانیسم های ایمنی بدن می شوند و به طور جدی تزریق پلاکت را غیرموثر و درمان را محدود می کند. (5). در نتیجه، بیماران به تزریق پلاکت مقاوم شده و مقادیر بیشتری از پلاکت ها برای از بین بردن اثر این آنتی بادی ها مورد نیاز است و مدیریت خونریزی بسیار دشوار می شود. علاوه بر آلوایمونیزاسیون در این بیماران نوعی مقاومت به تزریق پلاکت به صورت خونریزی مداوم علی رغم تزریق مقدار کافی پلاکت، یا خونریزی مجدد ظرف مدت 24 ساعت علی رغم تزریق مقدار مناسب پلاکت مشاهده می شود. با این حال، مشخص نیست که اغلب آنها چگونه رخ می دهد، و یا چرا عارضه در برخی بیماران و نه در همه بیماران دریافت کننده پلاکت توسعه می یابد.

IL-1،  یک سایتوکین مهم پلئوتروپیک با نقش های متعدد در هر دو حالت فیزیولوژیکی و پاتولوژیک است. IL1  به عنوان یک عامل در پیشرفت تومور از طریق بیان ژن های دخیل در متاستاز ، آنژیوژنز و فاکتورهای رشد شناخته شده است. اینترلوکین 1 با توانایی تحریک بیان فاکتورهای آنژیوژنز از قبیل VEGF و IL-8 باعث رشد تومور و متاستاز میشود(5). تعدادی از مطالعات گزارش داده اند که غلظت بالای  IL-1  در محیط میکروسکوپی با فنوتیپ سرطانی مرتبط است(6).

اینترلوکین A1 فاکتوری ضد التهابی است، بعلاوه به دلیل نقش متعادل سازی در تکثیر سلولی، هم در فرایندهای اپوپتوتیک و هم ضد اپوپتوتیک میتواند ایفای نقش کند این فاکتور در مسیر داخلی اپوپتوز یعنی مسیر میتوکندریایی عمل می کند (7, 8). گفته شده است که پلی‌مورفیسم های مختلف واقع در این ژن با انواع بیماریهای التهابی مثل پنومونی و انواع سرطان ها مرتبط می‌باشد (9-11(.

IL-1β  توسط سلول های هماتوپوییتیک از قبیل مونوسیت، ماکروفاژ، دنریتیک سل، میکروگلیا در پاسخ به اجزای کمپلمان و سایر سایتوکاین ها TNF-a) و (IL-1  تولید می شود(12). طی مطالعاتی که Krelin  و همکاران در سال 2007 مشاهده شد که موش هایی که دچار کمبود  IL-1β هستند،  پیشرفت تومور سیر آهسته تری طی میکند (13).IL-1β  با تعامل با VEGF موجب آنژیوژنز و متاستاز تومور میشود (14.(

گیرنده اینترلوکین نوع 1 (IL-1RI) بر روی اکثر سلول ها بیان می‌شود و مسئول انتقال سیگنال IL-1 است که با بکارگیری کیناز ها و پروتیئن های داخل سلولی باعث تسهیل انتقال سیگنال می‌شود(15). Carey و همکاران طی مطالعه ای در سال 2017 نشان دادند که در بیماران مبتلا به AML میزان گیرنده اینترلوکین نوع 1 (IL-1RI) افزایش یافته است و سرکوب این گیرنده به صورت معناداری موجب مهار پیشرفت بیماری میشود (16).

پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی یا (SNP) polymorphism nucleotide single تغییرات تک نوکلئوتیدی در توالی DNA  است که سبب ایجاد ژنوتیپ‌های مختلف می شود. طبق مطالعات انجام شده این تغییرات ژنتیکی ممکن است ریسک ابتلا به برخی بیماری ها   و مقاومت به درمان را در جمعیت هایی با ژنوتیپ خاصی افزایش دهند(17).

از جمله پلی‌مورفیسم هایی که ارتباط آن‌ها با پاسخ های ایمنی و مفاومت به درمان بررسی شده است؛ پلیمورفیسم های ژن IL-1 میباشد.  به طورمثال طی مطالعاتی ارتباط پلی مورفیسم‌های rs3783553 و rs3783550 در ژن IL1A، پلی مورفیسم  rs3917356و rs16944 در ژن IL1B و پلی مورفیسم rs10490571 در ژن IL1-R1 و تاثیر آن‌ها در ریسک ابتلا به سرطان بررسی شده است(18-21).

با توجه به شیوع مقاومت درمانی در این بیماران ترومباستنی گلانزمن، شناخت و بررسی عوامل خطر ژنتیکی در این بیماری و عوامل مقاومت درمان از اهمیت بالایی برخوردار میباشد. با توجه به اینکه تاکنون پلی مورفیسم های 3783553rs، rs3917356 ، rs3783550، rs3783521و VNTR بعنوان فاکتور های مهم در تغییر پاسخ هاس ایمنی شناخته شده است اما در ترومباستنی گلانزمن بررسی نشده اند؛ این مطالعه با هدف بررسی ارتباط پلی مورفیسم های مورد نظر در بیماران گلانزمن پی ریزی شده است. 

  فراوانی پلی مورفیسم rs3783553 در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs3783550 در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم rs3917356 در ژن IL1B در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

 فراوانی پلی مورفیسم rs16944  در ژن IL1B در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

 فراوانی پلی مورفیسم rs10490571 در ژن IL1Ra در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

فراوانی پلی مورفیسم VNTR  در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم متفاوت است.

تعیین پلی‌مورفیسم‌های ژن IL1 در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن در مقایسه با افراد سالم

فراوانی پلی مورفیسم rs3783553 در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

  فراوانی پلی مورفیسم rs3783550 در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

فراوانی پلی مورفیسم rs3917356 در ژن IL1B در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

فراوانی پلی مورفیسم rs16944   در ژن IL1B در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

 فراوانی پلی مورفیسم rs10490571 در ژن IL1Ra در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

 فراوانی پلی مورفیسم VNTR در ژن IL1A در بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن و افراد سالم

ندارد

ندارد

مورد - شاهدی

بیماران مبتلا به ترومباستنی گلانزمن (گروه مورد) و افراد سالم  (گروه شاهد) در زاهدان

بیمارانی که که بر اساس شاخص های هماتولوژیک و پاتولوژیک ترومباستنی گلانزمن تشخیص داده شده اند به عنوان گروه مورد انتخاب میشوند. معیار ورود به گروه شاهد عدم سابقه برای هر گونه بیماری زمینه ای و از جمله ترومباستنی گلانزمن و افراد از نظر سن وجنس و قوم با یکدیگر همسان سازی می شوند

با توجه به میزان افراد بیمارمراجعه کننده و همچنین با توجه به حجم نمونه سایر مقالات، حجم نمونه برای افراد مبتلا به ترومباستنی گلانزمن برابر 33 و گروه کنترل 100  نفرد در نظر گرفته شده است

آسان در دسترس

مشاهده و بررسی های آزمایشگاهی

پس از شناسایی بیماران گلانزمن، نمونه خون جمع آوری میگردد و با استفاده از کیت استخراج DNA، نمونه ها تلخیص شده، سپس پرایمرهای اختصاصی برای PCR طراحی میگردد. شرایط PCR بهینه سازی شده و محصولات PCR بر روی ژل الکتروفورز برده میشود و سپس ژنوتیپ ها نوالی یابی میگردد.

اطلاعات توسط نرم افزار آماری SPSS تجزیه و تحلیل خواهد شد. برای مقایسه آلل و ژنوتیپ در دو گروه از آزمون Fiher's exact و برای مقایسه پارامترهای دموگرافیک کیفی مثل جنس در دو گروه از آزمون Fiher's exac و برای مقایسه پارامترهای دموگرافیک کمی مثل سن در دو گروه نیز از آزمون t-test استفاده خواهد. و p کمتر از 0.05 بعنوان سطح معنی داری در نظر گرفته خواهد شد. همچنین odds ratio با محدوده اطمینان 95 درصد (CI) نیز برای افراد دارای اختلال ژنی برای ابتلا ابتلا ترومباستنی گلانزمن محاسیه خواهد شد.

کدهای 1و2و3و4و5و6و7و9و11و13و14 از راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی و کدهای 1و2وو5و7و8و9و10و11و12 از راهنمای اخلاقی پژوهشهای ژنتیک پزشکی و همچنین کدهای 1و2و3و4و6و7و8و9و11و12 از راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در این طرح رعایت خواهد شد.

-عدم همکاری بیمار

-مشکل تهیه مواد وامکان طولانی شدن زمان دریافت آنها

ترومباستنی گلانزمن، اینترلوکین 1، پلیمورفیسم

1.             Santoro C, Rago A, Biondo F, Conti L, Pulcinelli F, Laurenti L, et al. Prevalence of allo‐immunization anti‐HLA and anti‐integrin αIIbβ3 in Glanzmann Thromboasthenia patients. Haemophilia : the official journal of the World Federation of Hemophilia. 2010;16(5):805-12.

2.             Nurden AT, Pillois X, Nurden P. Understanding the genetic basis of Glanzmann thrombasthenia: implications for treatment. 2012.

3.             Bellucci S, Caen J. Molecular basis of Glanzmann's Thrombasthenia and current strategies in treatment. Blood reviews. 2002;16(3):193-202.

4.             Toogeh G, Sharifian R, Lak M, Safaee R, Artoni A, Peyvandi F. Presentation and pattern of symptoms in 382 patients with Glanzmann thrombasthenia in Iran. American journal of hematology. 2004;77(2):198-9.

5.             George JN, Caen JP, Nurden AT. Glanzmann’s thrombasthenia: the spectrum of clinical disease. Blood. 1990;75(7):1383-95.

6.            Ibrahim AA, Salem RM. IL1A (-889) gene polymorphism is associated with the effect of diet as a risk factor in Acne Vulgaris. 2018.

7.            Laberge RM, Sun Y, Orjalo AV, Patil CK, Freund A, Zhou L, et al. MTOR regulates the pro-tumorigenic senescence-associated secretory phenotype by promoting IL1A translation. Nature cell biology. 2015;17(8):1049-61.

8.            Yan H, Sun R, Pan X, Li Z, Guo X, Gao L. Lack of association between an insertion/deletion polymorphism in IL1A and risk of colorectal cancer. Genetics and molecular research : GMR. 2015;14(3):8490-5.

9.            Charbonneau B, Block MS, Bamlet WR, Vierkant RA, Kalli KR, Fogarty Z, et al. Risk of ovarian cancer and the NF-kappaB pathway: genetic association with IL1A and TNFSF10. Cancer research. 2014;74(3):852-61.

10.          Zhang K, Zhou B, Wang Y, Rao L, Zhang L. The TLR4 gene polymorphisms and susceptibility to cancer: a systematic review and meta-analysis. European journal of cancer (Oxford, England : 1990). 2013;49(4):946-54.

بررسی پلی مورفیسم های rs3783553، rs3783550، rs3783550، rs16944، rs10490571 و VNTR در بیماران ترومباستنی گلانزمن و سالم

نمونه گیری از خون تام، تلخیص DNA و انجام PCR

این تحقیق اگر چه فایده فوری نخواهد داشت اما بعلت بررسی استعداد ابتلا به بیماری گلانزمن
برای سایر افراد جامعه مفید خواهد بود.

این تحقیق اگر چه فایده فوری نخواهد داشت اما بعلت بررسی استعداد ابتلا به بیماری گلانزمن برای سایر افراد جامعه مفید خواهد بود.

در این طرح بغیر از خونگیری که توسط پرسنل مجرب صورت میگیرد،نمونه ای از بیمار گرفته نمیشود.تنها عارضه جانبی ممکن در زمان خونگیری خواهد بود که با توجه به خبره بودن پرسنل،بعید بنظر میرسد.

کلیه هزینه های تشخیصی به عهده مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

با استفاده از سایر روشها مثل آرمز پی سی آر و توالی یابی امکان انجام وجود دارد. 

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند

حسنا سارانی 

بیمارستان امام علی (ع)- مجتمع مراکز تحقیقاتی- تلفن 09150639781

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ندراد