بررسی پلی مورفیسم های Angiotensinogen rs699, angiotensinogen converting enzyme rs4341, rs4646994 and angiotensin type 1 receptor rs5186 gene در بیماران مبتلا به کووید19 ومقایسه آن با افراد سالم

بیماری کروناویروس 2019 (COVID-19) ناشی از سندرم حاد تنفسی حاد( coronavirus 2 SARS-CoV-2) یک وضعیت اضطراری بهداشت جهانی است. (1) 2019-CoV باعث بیماری مجاری دستگاه تنفسی تحتانی به نام پنومونی جدید کروناویروس (NCP) می شودکه ابتدا توسط دولت چین به این نام موسوم شد.  این بیماری متعاقباً توسط سازمان بهداشت جهانی به عنوان COVID-19 نام گرفت(1). در همین حال ، 2019-CoV توسط کمیته بین المللی طبقه بندی ویروس ها به SARS-CoV-2 تغییر نام داد.

کروناویروسها جزء ویروسهای پاکت دار، non-segmented و دارای RNA تک رشته ای، Positive-sense با منشا جانوری و متعلق به خانواده Coronaviridae و دسته Nidovirales میباشند(2). ویروس‌های کرونا گروه بزرگی از ویروس‌ها هستند که می‌توانند حیوانات و انسان‌ها را آلوده کنند و باعث بروز ناراحتی‌های تنفسی شوند. علایم تنفسی شامل یک طیف از سرماخوردگی تا ذات الریه می شوند و در اکثر موارد یک بیماری خفیف ایجاد می شود. ولی برخی از انواع کورونا ویروس ها علایم شدید ایجاد می کنند؛ مانند بیماری سارس(SARS) که اولین بار در سال 2002 میلادی از چین شروع شد و بیماری مرس(MERS) که در سال 2012 میلادی از عربستان شروع شد (3).

اگرچه کرونا ویروسها در ابتدا پاتوژنهای نسبتاً بی ضرر در نظر گرفته می شد، امروزه مشخص شده است که با عوارض بالینی شدیدتری همراه هستند. این ویروس می تواند علایم بالینی متفاوتی ایجاد کند. شایع ترین علامت تب است. سایر علایم، شامل سرفه ، خستگی ، میالژی می باشد. یافته های شایع آزمایشگاهی شامل تعداد طبیعی و یا افزایش یافته گلبول های سفید ، لنفوپنی کمتر از 800 عدد در میلی متر مکعب ، فزایش LDH ، افزایش دی دایمر و  افزایش آنزیم های کبدی می باشند (4). بیماران در سیر بیماری دچار عوارض متعددی می شوند که منجر به فوت آنها می گردد. میزان مرگ و میر در افرادی که ریسک فاکتور داشته باشند افزایش می یابد. ریسک فاکتورها شامل سن بالا تر از 65 سال، پرفشاری خون، دیابت، بیماری کرونری قلبی، بیماری مزمن ریه، سرطان، نقص ایمنی ، نارسایی مزمن کلیه و نارسایی مزمن کبد می باشند (4).

کرونا ویروسها برای ایجاد عفونت ها به پروتئین های سلول میزبان نیاز دارند.

ویروس ها برای زنده ماندن و تکثیر وابسته به پروتئین های رمزگذاری شده سلول میزبان و مکانیسم های مربوطه هستند. بسیاری از پروتئین های سلول میزبان در فرایند پیچیده پاتوژنز ویروسی مشارکت میکنند.

اجزای سطح سلول به عنوان گیرنده های اولیه مورد سوء استفاده  ویروس قرار گرفته به این صورت که ابن پروتین های غشایی موجبات ورود ویروس به داخل سلول میزبان را فراهم می آورند و در ایجاد  عفونت ویروسی نقش اساسی دارند. در نتیجه طبیعی است عملکردهای فیزیولوژیکی اجزای سلول میزبان دچار اختلال جدی شود که منجر به عفونت سلول، اندام یا فرد می گردد. ویروس ها به شدت از تنظیم بیان گیرنده بهره مند می شود زیرا منجر به کنترل فرآیندهای عفونی مولد می شود. برخی از ویروس ها سبب مدولاسیون گیرنده سلولی می شوند، از جمله HIV ، ویروس سرخک ، ویروس آنفلوانزا C و همچنین CoVs.

پروتئین های سیستم رنین-آنژیوتانسین به عنوان گیرنده های مورد نیاز برای ورود به سلول های هدف عمل می کنند (5). در بدن ابتدا پیش ساز هورمون یعنی آنژیوتانسینوژن توسط کبد ساخته و سپس در خون آزاد می‌شود. پروتئین آنژیوتانسینوژن توسط هورمون رنین به آنژیوتانسین یک تبدیل می‌شود و آنژیوتانسین یک توسط آنزیم مبدل آنژیوتانسین (ACE) که بیشتر در مویرگ‌های ریه یافت می‌شود به آنژیوتانسین دو تبدیل میگردد. البته این آنزیم در سایر نقاط نیز یافت می‌شود ولی محل تجمع اصلی آن آندوتلیوم مویرگ‌های ریه‌است. ACE  یک کربوکسی پتیداز است که ترجیحا قسمتهای کربوکسی آبگریز انتهایی یا اسیدهای آمینه بازی (دواسید آمینه لوسین-هیستیدین) را در آنژیوتانسین یک حذف می کند.  ACEبه عنوان یک پروتئین transmembrane ، به عنوان اصلی ترین نقطه ورود به سلول برای برخی از کروناویروس ها است(6). نشان داده شده است که ACE در دهان و زبان بسیار بیان می شود که ورود ویروسی به داخل بدن میزبان را تسهیل می کند(7). این امر موجب شده است که برخی فرض کنند که کاهش سطح ACE در سلولها می تواند در مبارزه با عفونت کمک کند.

نشان داده شده است که یک پلی مرفیسم (del/ins) در اینترون 16 ژن ACE سبب کاهش بیان این پروتئین می شود(8).از آنجایی که این پلی مورفیسم D / I تغییرات جغرافیایی مهمی را نشان می دهد، به نظرمی رسد که تنوع در توزیع ژنوتیپ  D / Iتا حدی ممکن است شیوع متغیر عفونت COVID-19 را  در میان اقوام و نژادهای مختلف توضیح دهد. لذا هدف از این تحقیق بررسی پلی مورفیسم های Angiotensinogen rs699, angiotensinogen converting enzyme rs4341, rs4646994 and angiotensin type 1 receptor rs5186 gene در بیماران مبتلا به کرونا ویروس ومقایسه آن با افراد سالم می باشد.

فراوانی ژنوتیپ های Angiotensinogen rs699 در بیماران مبتلا به کووید19 با افراد سالم متفاوت است

فراوانی ژنوتیپ های Angiotensin type 1 receptor rs5186 در بیماران مبتلا به کووید19 با افراد سالم متفاوت است

فراوانی ژنوتیپ هایAngiotensinogen converting enzyme rs4341  در بیماران مبتلا به کووید19 با افراد سالم متفاوت است

فراوانی ژنوتیپ rs4646994های Angiotensinogen در بیماران مبتلا به کووید19 با افراد سالم متفاوت است

تعیین پلی مورفیسم های Angiotensinogen rs699, angiotensinogen converting enzyme rs4341, rs4646994 and angiotensin type 1 receptor rs5186 gene در بیماران مبتلا به کووید 19 ومقایسه آن با افراد سالم

1  -مقایسه فراوانی ژنوتیپ  های  Angiotensinogen rs699  بیماران مبتلا به کووید 19با افراد سالم

2-مقایسه فراوانی ژنوتیپ های angiotensin type 1 receptor rs5186 بیماران مبتلا به کووید 19 با افراد سالم

3-مقایسه فراوانی ژنوتیپ  Angiotensinogen converting enzyme rs4341 بیماران مبتلا به کووید 19 با افراد سالم

4- مقایسه فراوانی ژنوتیپ هایrs4646994  Angiotensinogen converting enzyme  بیماران مبتلا به کووید 19 با افراد سالم

دانشگاه علوم پزشکی زاهدان

کووید19- بیماران مبتلا به کووید 19

  مورد – شاهدی

کلیه بیماران مبتلا به کووید 19 که در سال 1399جهت ارزیابی و درمان به بیمارستان بوعلی شهرستان زاهدان مراجعه می کنند.

   حجم نمونه حداقل150 نفر شامل کلیه بیماران به کووید 19  تشخیص داده شده، تحت درمان یا درمان شده شهرستان زاهدان درسال 1399 . به همین تعداد نیز از افراد سالم جامعه که به بیماری کووید 19 مبتلا نشده اند وسابقه هیچگونه بیماری سیستمیک ندارند انتخاب می شوند.

آسان و در دسترس( تصادفی ساده)

مشاهده و بررسی‌های آزمایشگاهی

پس از تصویب پروپوزال از بیمارانی که براساس معیارهای تشخیصی در آنها ابتلا به کووید 19 تشخیص داده ‌شود پس از کسب رضایت کامل از بیماران خونگیری ‌میشود. نمونه ها با این تکنیک برای بررسی  پلی مورفیسم و حذف ژنی نمونه خون در 20- درجه سانتیگراد نگهداری می‌شود. DNA نمونه خون افراد به روش salting out تخلیص می‌شود. پرایمرهای اختصاصی جهت تعیین پلی مورفیسم ژنی به روشPCR یا RFLP- PCRطراحی می شود. در مرحله بعد شرایط PCR برای تعیین این پلی مورفیسم ها بهینه می شود و سپس پلی مورفیسم ها ی ژنی ذکر شده آنالیز می شوند.

پس از گردآوری اطلاعات لازم، یافته‌ها در نرم‌افزار آماری SPSS وارد شده و داده‌های کیفی با استفاده از آزمون آماری  کای دو و متغیرهای کمی با آزمون تی مستقل مورد تجزیه و تحلیل قرار میگیرد.

کدهای 1و2و3و4و5و6و7و9و11و13و14 از راهنمای عمومی اخلاق در پژوهش‌های علوم پزشکی دارای آزمودنی انسانی و کدهای 1و2وو5و7و8و9و10و11و12 از راهنمای اخلاقی پژوهشهای ژنتیک پزشکی و همچنین کدهای 1و2و3و4و6و7و8و9و11و12 از راهنمای اخلاقی پژوهش بر روی عضو و بافت انسانی در این طرح رعایت خواهد شد.

عدم همکاری بیماران جهت تهیه نمونه ها

کرونا

کووید 19

آنژیوتانسین

پلی مرفیسم

1.         Yuen KS, Ye ZW, Fung SY, Chan CP, Jin DY. SARS-CoV-2 and COVID-19: The most important research questions. Cell Biosci. 2020;10:40.

2.         Chen Y, Liu Q, Guo D. Emerging coronaviruses: Genome structure, replication, and pathogenesis. J Med Virol. 2020;92(4):418-23.

3.         Perico L, Benigni A, Remuzzi G. Should COVID-19 Concern Nephrologists? Why and to What Extent? The Emerging Impasse of Angiotensin Blockade. Nephron. 2020:1-9.

4.         Zhou F, Yu T, Du R, Fan G, Liu Y, Liu Z, et al. Clinical course and risk factors for mortality of adult inpatients with COVID-19 in Wuhan, China: a retrospective cohort study. Lancet. 2020;395(10229):1054-62.

5.         Wevers BA, van der Hoek L. Renin-angiotensin system in human coronavirus pathogenesis. Future Virol. 2010;5(2):145-61.

6.         Hoffmann M, Kleine-Weber H, Schroeder S, Kruger N, Herrler T, Erichsen S, et al. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor. Cell. 2020.

7.         Diaz JH. Hypothesis: angiotensin-converting enzyme inhibitors and angiotensin receptor blockers may increase the risk of severe COVID-19. J Travel Med. 2020.

8.         Delanghe JR, Speeckaert MM, De Buyzere ML. The host's angiotensin-converting enzyme polymorphism may explain epidemiological findings in COVID-19 infections. Clin Chim Acta. 2020.

بررسی پلی مورفیسم های Angiotensinogen rs699, angiotensinogen converting enzyme rs4341, rs4646994 and angiotensin type 1 receptor rs5186 gene در بیماران مبتلا به کووید19 ومقایسه آن با افراد سالم

نمونه گیری وتخلیص DNA  از خون تام و انجام PCR

این تحقیق اگر چه فایده فوری نخواهد داشت اما بعلت بررسی استعداد ابتلا به بیماری کووید19 برای سایر افراد جامعه مفید خواهد بود.

در این طرح بغیر از خونگیری که توسط پرسنل مجرب صورت میگیرد،نمونه ای از بیمار گرفته نمیشود.تنها عارضه جانبی ممکن در زمان خونگیری خواهد بود که با توجه به خبره بودن پرسنل،بعید بنظر میرسد

جبران عوارض احتمالی بر عهده پژوهشگران خواهد بود.

کلیه هزینه های تشخیصی به عهده مجریان طرح خواهد بود و بیمار هزینه ای را پرداخت نخواهد کرد.

در این قسمت باید شرح داده شود که در صورت عدم پذیرش روش انتخابی پژوهشگر، بیمار از چه روشهای درمانی یا تشخیصی دیگرتوسط پژوهشگر می تواند استفاده نماید.

نتایج آزمایشها و روشهای به کار رفته به اطلاع بیمار خواهد رسید و این نتایج بصورت کاملاً محرمانه و صرفاً جهت مقاصد پژوهش به کار خواهد رفت و هویت بیماری وی در چارچوب قانون و جامعه و خانواده محرمانه خواهد ماند

دکتر محسن طاهری

زاهدان- پردیس دانشگاه علوم پزشکی- دانشکده پزشکی- گروه ژنتیک

تلفن: 09151431350

شرکت من در مطالعه کاملاً اختیاری است و آزاد خواهم بود که از شرکت در مطالعه امتناع نموده یا هر زمان  که مایل بودم بدون آنکه تغییری در نحوه رفتار پزشک درمانگر یا نحوه درمان و مراقبت از بیماری اینجانب ایجاد شود از پژوهش مذکور خارج شوم.

با توجه به اطلاعات موجود در این فرم و توضیحات حضوری مجری یا همکاران طرح موافقت خود را با شرکت در این مطالعه اعلان می نمایم. یک نسخه از این فرم به من داده شده و فرصت خواندن آن را داشته ام.

ندارد